蛋白(bái)質鑒定

　　●　分(fēn)子量檢測

　　●　氨基酸序列分(fēn)析（PMF）

　　●　未知(zhī)蛋白(bái)鑒定

　　●　糖基化修飾肽段鑒定

　　●　翻譯後修飾鑒定

★　蛋白(bái)質質譜鑒定技術原理和方法

MALDI-TOF

基質輔助激光解吸/電(diàn)離(lí)飛行時間質譜技術（Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight, MALDI-TOF）的基本原理是将分(fēn)析物(wù)分(fēn)散在基質分(fēn)子中(zhōng)并形成晶體(tǐ)，當用激光照射晶體(tǐ)時，由于基質分(fēn)子經輻射所吸收的能量，導緻能量蓄積并迅速産熱，從而使基質和分(fēn)析物(wù)共結晶升華進入氣相。MALDI所産生(shēng)的質譜圖多爲單電(diàn)荷離(lí)子。MALDI産生(shēng)的離(lí)子常用飛行時間（TOF）檢測器來檢測，理論上講，隻要飛行管的長度足夠，TOF檢測器可檢測分(fēn)子的質量數是沒有上限的，因此MALDI-TOF質譜很适合對蛋白(bái)質、多肽等生(shēng)物(wù)大(dà)分(fēn)子的研究。

★　技術特點

　　●　MALDI-TOF 鑒定方便、快速，可以同時做上百個斑點

　　●　主要用于純蛋白(bái)或簡單樣本的鑒定，如SDS-PAGE斑點、2-DE斑點

　　●　成本較低

★　樣品要求

　　●　蛋白(bái)質溶液：純度> 90%；蛋白(bái)質總量> 5 ug，濃度> 0.1 ug/ul

　　●　雙向凝膠電(diàn)泳點：考染、銀染點清晰可見

　　●　SDS-PAGE膠條：單一(yī)蛋白(bái)質，考染、銀染條帶清晰可見

★　質譜技術的應用

1. 蛋白(bái)質純度分(fēn)析以及分(fēn)子量測定

MALDI-TOF是一(yī)種軟電(diàn)離(lí)技術，可用于檢測目标蛋白(bái)或多肽是否存在,有無二聚體(tǐ)存在,以及進行純度情況的大(dà)體(tǐ)評估。MALDI-TOF鑒定分(fēn)子量範圍也非常廣，能夠鑒定700-1000000Da的蛋白(bái)分(fēn)子量，準确度高達0.1%~0.01%，遠遠高于目前常規應用的SDS電(diàn)泳與高效凝膠色譜技術。

2. 蛋白(bái)指紋譜鑒定（PMF）

肽質量指紋譜（Peptide Mass Fingerprinting, PMF）是蛋白(bái)質被識别特異酶切位點的蛋白(bái)酶水解後得到的肽片段的質量圖譜。由于每種蛋白(bái)的氨基酸序列（一(yī)級結構）都不同，當蛋白(bái)被水解後，産生(shēng)的肽片段序列也各不相同，因此其肽質量指紋圖也具有特征性。将肽譜圖與數據庫中(zhōng)蛋白(bái)質理論肽譜圖對比，從而鑒定蛋白(bái)質。因此，分(fēn)子質量的精确度是PMF的關鍵指标所在，但蛋白(bái)質的翻譯後修飾可能使PMF的質量數與理論值不符，從而對蛋白(bái)鑒定的準确度有一(yī)定影響。

3. MS/MS串聯質譜法測序

串聯質譜法(MS/MS)，是目前常用的質譜鑒定方式。MS/MS先通過一(yī)級質譜測定肽段質量，再選取豐度高的肽段進行二級質譜分(fēn)析，在二級質譜中(zhōng)肽段相互碰撞導緻氨基酸鍵斷裂，産生(shēng)肽段碎片離(lí)子經由檢測器分(fēn)析，從而得到篩選肽段的氨基酸序列信息。MS/MS利用豐富肽段碎片的精确質量信息，更具有特異性、可信度，極大(dà)地增加了數據庫檢索的可靠性。